Введение
Ветеринарная лабораторная диагностика в последние годы переживает заметную трансформацию: растёт число исследований методом ПЦР, иммуноферментного анализа, хроматографических методов определения остаточных количеств ветеринарных препаратов в продукции животного происхождения. Параллельно повышаются требования к достоверности получаемых результатов — от этого напрямую зависит эпизоотическое благополучие территорий и безопасность продуктов, поступающих на стол потребителя. Именно в этой точке пересекаются интересы аналитической химии, микробиологии, молекулярной биологии и метрологии — дисциплин, которые вместе формируют современную практику ветеринарно-санитарной экспертизы.
Актуальность обращения к теме валидации биоаналитических методик обусловлена несколькими обстоятельствами. Во-первых, с 2021 года в Российской Федерации усилен контроль за антибиотикорезистентностью патогенов, выделяемых из продукции животного происхождения, что требует применения проверенных, метрологически обоснованных методов анализа [12, c. 28]. Во-вторых, пандемийный опыт 2020–2021 годов показал, насколько быстро может возникать потребность в разработке и внедрении новых тест-систем — достаточно вспомнить работу по созданию отечественной ПЦР-диагностики SARS-CoV-2 у животных [11]. Такие ситуации требуют оперативной, но при этом методологически строгой валидации. В-третьих, вступление в силу ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2019 закрепило единые требования к компетентности испытательных лабораторий, включая ветеринарные, и поставило вопрос о разграничении понятий «валидация» и «верификация» на практический уровень [3].
Картина здесь неоднородная: далеко не всегда специалисты лабораторного звена чётко различают, когда методика требует полной валидации, а когда достаточно верификационной процедуры. На практике это нередко проявляется в том, что лаборатории либо избыточно перегружают себя валидационными исследованиями там, где регламент допускает упрощённую проверку, либо, напротив, ограничиваются формальной верификацией методик, разработанных для иных матриц или иных диапазонов концентраций. Подобная терминологическая и методологическая путаница напрямую влияет на достоверность результатов ветеринарно-санитарной экспертизы, а следовательно — на продовольственную безопасность.
Ветеринарная медицина и ветеринарно-санитарная экспертиза сегодня оперируют широким спектром биоаналитических методов: от классических микробиологических посевов до высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, применяемой, например, для определения остаточных количеств фторхинолоновых антибиотиков в куриных яйцах [8, c. 31]. Каждый из этих методов требует собственного подхода к оценке пригодности, поскольку различается природа определяемого вещества, матрица, чувствительность требуемого диапазона.
Целью настоящего реферата является систематизация теоретических и практических аспектов валидации биоаналитических методов в ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизе, а также определение критериев разграничения валидации и верификации в лабораторной практике.
Для достижения поставленной цели решаются следующие задачи:
— раскрыть теоретические основы валидации биоаналитических методов применительно к ветеринарной медицине;
— провести сравнительный анализ процедур валидации и верификации методик;
— классифицировать виды валидации и определить критерии их выбора в лабораторной практике;
— охарактеризовать основные аналитические параметры оценки качества биоаналитических процедур;
— рассмотреть нормативно-правовые требования к компетенции испытательных лабораторий;
— оценить роль валидационных испытаний в обеспечении ветеринарно-санитарной безопасности.
Структура работы выстроена от общего к частному: сначала закладывается теоретический фундамент, затем разбираются понятийные различия, далее — практическая классификация и метрологические параметры, после чего рассматриваются нормативные рамки и завершается работа оценкой прикладной значимости валидационных процедур для отрасли.
Методологической базой реферата служат положения действующего российского законодательства — Закона РФ «О ветеринарии» [1] и Федерального закона «О качестве и безопасности пищевых продуктов» [2], а также отечественные и переводные работы по метрологии химического анализа [6], валидации фармацевтических методик [4; 10] и специализированные публикации по ветеринарно-санитарной экспертизе [5].
- Теоретические основы валидации биоаналитических методов в ветеринарной медицине
Понятие валидации пришло в ветеринарную лабораторную практику из фармацевтической и аналитической химии, где оно давно закрепилось как обязательный элемент разработки любой методики количественного или качественного определения [4, c. 15]. Применительно к биоаналитике под валидацией понимают документированную процедуру подтверждения того, что методика способна давать результаты, соответствующие заявленным требованиям — по точности, воспроизводимости, специфичности и другим параметрам, — во всём диапазоне условий её предполагаемого применения.
Ветеринарная специфика здесь довольно ощутима. Биологические матрицы, с которыми работает специалист ветеринарно-санитарной экспертизы — мясо, молоко, яйца, кровь, ткани внутренних органов животных, — крайне разнородны по составу и подвержены значительной индивидуальной вариабельности. Матрица влияет на результат анализа не менее сильно, чем сам аналит; отсюда требование обязательной проверки методики на конкретном виде сырья, а не переноса результатов валидации «по аналогии». Скажем, методика определения фторхинолонов, разработанная для тканей птицы, не может автоматически считаться валидной для куриного яйца — потребовалась отдельная валидационная работа именно на этой матрице, что подтверждается опытом отечественных исследователей, занимавшихся определением остаточных количеств антибиотиков методом ВЭЖХ [8, c. 32].
Теоретически валидация опирается на несколько базовых пр
…
